Anticorpi anti SARS-CoV-2 TrimericS IgG (neutralizanți)

Testul utilizează tehnologia de chemiluminescență (CLIA) pentru determinarea cantitativă a anticorpilor față de proteina spike trimerică nativă a SARS CoV-2. Este un test serologic de generația a II-a util atât în diagnosticul COVID-19 cât și în evaluarea statusului imun al pacienților infectați cu SARS-CoV-2 sau vaccinați împotriva virusului.

Testul utilizează ca antigen o glicoproteină recombinantă: TRIMERIC SARS-CoV-2. Glicoproteina trimerică spike (S) este o proteină virală de fuziune de clasă I situată în învelișul extern al virionului și joacă un rol critic în infecția virală prin recunoașterea receptorilor celulei gazdă și medierea fuziunii dintre virus și membrana celulară. Glicoproteina spike (S) transmembranară formează homotrimeri, ținta principală a anticorpilor neutralizanți și ținta primară pentru dezvoltarea vaccinurilor și a altor tratamente.

Utilizarea glicoproteinei spike trimerice native ca antigen de captură, asigură testului caracteristici superioare:

• Determinarea cantitativă a anticorpilor tip IgG față de glicoproteina trimerică spike
• Detecția exactă și precisă a anticorpilor neutralizanți
• Sensibilitate clinică de 98.7% și specificitate clinică de 99.5%
• Corelație cu testul de microneutralizare (MNT) de 100% pentru PPA (acord procentual pozitiv) și 96.9% pentru NPA (acord procentual negativ)
• Corelarea rezultatelor obținute cu valorile și cu unitatea de măsură a standardului internațional OMS pentru activitatea de legare a imunoglobulinei anti-SARS-CoV-2 (NIBSC 20-136)

Toți cei trei lideri în cursa vaccinurilor (Moderna, AstraZeneca & Oxford, Pfizer & BioNTech) folosesc proteina spike, sub forma trimerică, ca și antigen.

Recomandări pentru determinarea anticorpilor neutralizanți anti-SARS-CoV-2 TrimericS IgG

În ceea ce privește infecția cu SARS-CoV-2, testul este util pentru monitorizarea statusului imun al pacienților infectați prin detecția cantitativă a nivelului de anticorpi neutralizanți. Se recomandă însă ca rezultatele să fie folosite în conjuncție cu alte informații clinice și de laborator pentru a confirma sau exclude diagnosticul infecției cu SARS-CoV-2 sau pentru a stabili statusul infecțios al pacientului.

În urma programelor de vaccinare, se recomandă ca detecția și monitorizarea anticorpilor să fie utilizată pentru:

• confirmarea obținerii imunității post vaccinale
• monitorizarea duratei răspunsului imun

SARS-COV-2 conține patru proteine structurale majore: glicoproteina S (spike), proteina M (membranară), proteina E (envelope), proteina N (nucleocapsidă). Proteina N înglobează genomul ARN viral iar proteinele S, E și M formează învelișul extern.

Proteina spike este formată prin unirea a 3 lanțuri polipeptidice ceea ce generează o structură trimerică a proteinei native.

Întreaga structură proteică este împărțită în două subunități (S1 și S2):

• Subunitatea S1 este responsabilă de legarea la receptorul celulei gazdă și este formată din: domeniul terminal NTD, RBD, subdomeniile SD1 si SD2.
• Subunitatea S2 este responsabilă de fuziunea membranelor virale și celulare, fiind formată din peptidă de fuziune (FP), regiunile de repetare heptată (HR 1 si HR 12) domeniul transmembranar (TD) și coadă citoplasmatică (CT).

Ref: Wrapp 2020; Bangaru 2020

Domeniul de legare al receptorului (RBD), parte a glicoproteinei S, se leagă de receptorul uman ACE2. Acest mecanism de legare este un factor important în determinarea infecţiozităţii virale şi evoluţia COVID-19, fiind de asemenea o ţintă importantă pentru dezvoltarea vaccinurilor şi a altor tratamente. Glicoproteina spike (S) a coronavirusului este o proteină de fuziune virală (clasa I), de pe anvelopa externă a virionului, cu rol critic în infecția virală prin cele două subunități funcționale

Anticorpii neutralizanți sunt formați împotriva domeniului RBD și a altor epitopi situați în regiuni imunogene.

Glicoproteina S transmembranară formează homotrimeri fiind ținta principală a anticorpilor neutralizanți și ținta primară în proiectarea vaccinului.

Conformația nativă a glicoproteinei spike este dependentă de forma trimerică, asocierea monomerilor generează epitopi conformaţionali care nu sunt prezenţi pe formele recombinante monocatenare şi trunchiate care provin exclusiv din RBD.

În vivo anticorpii sunt produşi împotriva formei trimerice a proteinei Spike, atât împotriva epitopilor liniari (secvenţiali) cât şi a epitopilor conformaţionali.

Interpretarea rezultatelor testului SARS-CoV-2 TrimericS IgG

Un rezultat < 33.8 BAU/mL este negativ, indicând absența sau un nivel foarte scăzut al anticorpilor neutralizanți anti-SARS-CoV-2 IgG.

Un rezultat ≥ 33.8 BAU/mL este pozitiv, indicând prezența anticorpilor neutralizanți anti-SARS-CoV-2 IgG.

Nu există reacții încrucișate față de: coronavirusuri umane (229E, OC43, HKU1, NL63), virus Epstein Barr, Borrelia burgdorferi, virus West-Nile, virus varicelo-zosterian, cytomegalovirus, virus rubeolic, HSV-1/2, Parvovirus B19, HIV, virus hepatic C, virus respirator sincițial, Influenza A și B, metapenumovirus uman, rinovirus. De asemenea, nu au fost descrise reacții încrucișate cu factorul reumatoid sau HAMA (anticorpi umani anti-șoarece).

• Sensibilitate clinică: 98.7% PPA (acord pozitiv procentual) la mai mult de 15 zile de la confirmarea infecției prin metoda RT- PCR
• Specificitate clinică: 99.5% NPA (acord negativ procentual) pe un lot de 1899 persoane aparent sănătoase
• 96.9% corelație negativă și 100% corelație pozitivă cu Testul de Microneutralizare. Testul de microneutralizare este metoda prin care se determină titrul de neutralizare al probei, reprezentând cea mai mare diluție a probei pentru care se obține o inhibiție mai mare de 50% a efectului citopatic pe o cultură monostrat de celule Vero E6.

Evaluarea testului SARS-CoV-2 TrimericS IgG față de standardul internațional OMS pentru imunoglobuline anti-SARS-CoV-2 permite exprimarea rezultatelor în unități de legare a anticorpilor (binding antibody units) - BAU/mL și facilitează compararea rezultatelor obținute cu reactivi de la diferiți producători, dar care detectează aceeași clasă de imunoglobuline cu aceeași specificitate antigenică.